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產(chǎn)品展示

細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:常用的細(xì)胞培養(yǎng)基有很多種,例如:DMEM培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、McCoy's 5A(改良)培養(yǎng)基、Ham's F-12營養(yǎng)培養(yǎng)基等。

產(chǎn)品型號(hào):

更新時(shí)間:2024-07-18

廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家

訪 問 量 :4034

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產(chǎn)品介紹

一、常用的細(xì)胞培養(yǎng)基介紹

1. BME培養(yǎng)基,基礎(chǔ) Eagle 培養(yǎng)基(basal medium eagle)

BME培養(yǎng)基是一種廣泛使用的合成基礎(chǔ)培養(yǎng)基,可支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長。BME 最初由 Harry Eagle 針對(duì) HeLa 細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞開發(fā),其發(fā)現(xiàn)了體外細(xì)胞生長的zui 低要求。BME 不含蛋白、脂類或生長因子。因此,BME 需要添加劑。

2. MEM培養(yǎng)基(Minimum Eagle's Medium)

MEM培養(yǎng)基是所有培養(yǎng)基中zui常用的一種,可用于多種懸浮和貼壁生長的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,包括 HeLa、BHK-21、293、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纖維細(xì)胞和原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞。

3. DMEM培養(yǎng)基,Dulbecco 改良 Eagle 培養(yǎng)基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)

DMEM培養(yǎng)基是一種廣泛使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,可用于支持很多種類的哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長。已經(jīng)在 DMEM 中培養(yǎng)成功的細(xì)胞包括原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞,以及 HeLa、293、Cos-7 和 PC-12 等細(xì)胞系。

4. IMDM培養(yǎng)基(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)

IMDM培養(yǎng)基是一種高度富集的合成培養(yǎng)基,非常適用于快速增殖的高密度細(xì)胞培養(yǎng),包括 Jurkat、COS-7 和巨噬細(xì)胞。

5. RPMI-1640培養(yǎng)基(Roswell Park Memorial Institute 1640)

RPMI-1640 培養(yǎng)基被發(fā)現(xiàn)適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞,包括 HeLa 細(xì)胞、Jurkat 細(xì)胞、 MCF-7 細(xì)胞、PC12 細(xì)胞、PBMC 細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞。RPMI 1640 培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有*的效果,是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。RPMI 1640 培養(yǎng)基含有生物素、 維生素 B12 以及 PABA,這些成分是 Eagle’s MEM 和DMEM所不具備的。

6. M199培養(yǎng)基(Medium 199)

199 培養(yǎng)基最初配方用于雞胚成纖維細(xì)胞的營養(yǎng)研究。199 培養(yǎng)基由 Earle’s 平衡鹽或 Hanks’ 平衡鹽配制而成。由 Earle’s 平衡鹽配制而成的培養(yǎng)基使用碳酸氫鹽/碳酸系統(tǒng)緩沖液,并在 CO2培養(yǎng)箱中保持 pH 值。 在大氣條件下使用 Earle’s 平衡鹽會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 值迅速升高。由 Hanks’ 平衡鹽配制而成的 199 培養(yǎng)基使用專為大氣平衡設(shè)計(jì)的專用鹽溶液進(jìn)行緩沖,在CO2 培養(yǎng)箱中使用會(huì)令培養(yǎng)基 pH 值迅速下降。

7. McCoy's 5A(改良)培養(yǎng)基(McCoy's 5A (Modified) Medium)

McCoy's 5 A (改良)培養(yǎng)基是一種通用培養(yǎng)基,可支持多種類型原代細(xì)胞、成熟細(xì)胞系以及活檢組織塊的增殖。這種培養(yǎng)基可支持源自正常骨髓、皮膚、脾臟、腎臟、肺、大鼠胚胎及其他組織的原代哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長。Thomas McCoy 博士起初將 McCoy's5 A 培養(yǎng)基配制為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 5 A 的改良版本。與其他培養(yǎng)基不同,McCoy's5 A 包含還原劑谷胱甘肽、細(xì)菌蛋白胨和高濃度葡萄糖。McCoy's 5A(改良)培養(yǎng)基使用碳酸氫鈉緩沖體系 (2.2 g/L),因此需要 5–10% CO2 的環(huán)境來維持生理 pH 值。

8. Ham's F-12營養(yǎng)培養(yǎng)基


Ham's F-12 營養(yǎng)混合物 (F-12) 起初設(shè)計(jì)用于中國倉鼠卵巢 (CHO) 細(xì)胞的無血清單細(xì)胞鋪板。自此之后,F(xiàn)-12 已用于 CHO 培養(yǎng)物的無血清生長以及其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞的添加血清生長,包括軟骨細(xì)胞和大鼠前列腺上皮細(xì)胞。與其他基礎(chǔ)培養(yǎng)基相比,F(xiàn)-12 含有更廣泛的成分,包括鋅、腐胺、Hypoxanthine和胸苷。CHO 細(xì)胞在 F-12 中的無血清生長催生了各種改良配方。

9. Leibovitz L15培養(yǎng)基

Leibovitz L-15 培養(yǎng)基支持 HEP-2 猴腎臟細(xì)胞以及胚胎和成人組織的原代組織塊生長。L-15 采用磷酸鹽和游離氨基酸而非碳酸氫鈉進(jìn)行緩沖。這種培養(yǎng)基適用于支持非 CO2 平衡環(huán)境中的細(xì)胞生長。L-15 不含蛋白、脂質(zhì)或生長因子。

10. Neurobasal培養(yǎng)基

Neurobasal 培養(yǎng)基是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基,設(shè)計(jì)用于純產(chǎn)前和胚胎神經(jīng)元細(xì)胞群的長期維持和成熟,在與 Gibco B-27 補(bǔ)充劑配合使用時(shí)無需星形膠質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)層。Neurobasal 培養(yǎng)基適用于大多數(shù)神經(jīng)元細(xì)胞應(yīng)用。

我司可為細(xì)胞培養(yǎng)的客戶提供多種進(jìn)口、國產(chǎn)品牌的培養(yǎng)基產(chǎn)品,詳詢業(yè)務(wù)員!!!


二、常用的細(xì)胞培養(yǎng)基配套試劑(緩沖液、平衡鹽溶液等)

1、無鈣、鎂、離子溶液(1000ml)

氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫鈉、(NaH2PO4H20)0.05g、Potassium chloride (KCl)0.2g、碳酸氫鈉(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL

2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸鹽緩沖液

甲液:0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液、磷酸氫二鈉(無水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL

乙液:0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液、磷酸二氫鈉(無水)2.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL

甲、乙液于4℃保存,使用時(shí)按表3-2所示比例,配制成所需pH濃度,高壓滅菌后室溫保存。

3、Hanks液(HBSSHank's Balanced salt solution)

⑴母液甲(20x)配法

①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中,前一物質(zhì)溶后再加后一種。

②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中,溶時(shí)不斷攪拌(此液應(yīng)單配,單溶)。

待上述兩溶液中的"溶質(zhì)"全溶后,將它們混合,再用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,向其中加2mL氯仿作為防腐劑,置4℃保存。

⑵母液乙(20×)配法

①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。

②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL,直到全部溶解,移入100mL容量瓶中,加水至100mL,過濾,pH為7.4,4℃保存。

待上述各"溶質(zhì)"*溶解后,用雙蒸水補(bǔ)至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐劑,置40℃保存。

3)使用液(1×)配法

取母液甲和母液乙各一份,加雙蒸水18份,分裝后,塞好瓶塞,掛上標(biāo)志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞),置室溫后4℃保存,可使用幾個(gè)月。臨用前,用7.5%NaHCO3調(diào)至所需pH。

4、Eagle's液(EBSSEagle's Balanced salt solution)

是一種在二氧化碳(CO2)環(huán)境中短期維持細(xì)胞活性的平衡鹽溶液,可用于細(xì)胞解離前的清洗、細(xì)胞或組織的運(yùn)輸、細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)稀釋、溶液的配置等。

5、HEPES液

生物緩沖液,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,在PH7.2~7.6范圍內(nèi),比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強(qiáng)。

6、NaHCO3緩沖液

常規(guī)緩沖體系的一部分,但是不穩(wěn)定,易受空氣中CO2的含量而改變PH值,影響緩沖效果。


三、相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)

細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。細(xì)胞培養(yǎng)是指從動(dòng)物活體體內(nèi)取出組織,于模擬體內(nèi)生理環(huán)境等特定的體內(nèi)條件下,進(jìn)行孵育培養(yǎng),使之生存并生長。細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個(gè)領(lǐng)域。通過細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。細(xì)胞的生長需要營養(yǎng)環(huán)境,用于維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按其物理狀態(tài)可分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。


根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn),需要選擇不同方法進(jìn)行細(xì)胞傳代:

◆ 貼壁生長的細(xì)胞用消化法傳代;

◆ 部分貼壁生長(半懸浮生長)的細(xì)胞用直接吹打可傳代;

◆ 懸浮生長的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打傳代。

1.  貼壁細(xì)胞的消化法傳代:

1)先吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。

2)D-Hanks液洗2~3次。

3)向瓶?jī)?nèi)加入適量消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有細(xì)胞表面。(注意:胰蛋白酶要預(yù)溫,溫度37℃左右為宜。)

4)消化最好在37℃環(huán)境下進(jìn)行,消化2~5 min 后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮,細(xì)胞間隙增大后,應(yīng)立即終止消化。

5)吸除或倒掉消化液,如用EDTA消化,需加Hanks液數(shù)毫升,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶把殘留消化液沖掉,再添加培養(yǎng)液。如僅用胰蛋白酶可直接加少許含血清的培養(yǎng)液,終止消化。

6)用彎頭吸管,吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞。從培養(yǎng)瓶底部一邊開始到另一邊結(jié)束,以確保所有底部都被吹到,使細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔,不要用力過猛。

7) 細(xì)胞計(jì)數(shù)后分別接種在新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。

8)置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(注意:要定時(shí)觀察細(xì)胞,如發(fā)現(xiàn)污染,應(yīng)及時(shí)處理。)



2.  懸浮細(xì)胞的傳代:懸浮細(xì)胞傳代可離心收集細(xì)胞后傳代,或直接傳代。

離心傳代法:

1) 將細(xì)胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到15 ml 離心管內(nèi)。

2) 800~1000 rpm離心5 min。(注意:離心轉(zhuǎn)速要合適。轉(zhuǎn)速過低,不能有效分離細(xì)胞;離心速度過大,時(shí)間過長,會(huì)擠壓細(xì)胞造成損傷甚至死亡。)

3) 棄去上清,加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi),用吸管吹打形成細(xì)胞懸液。

4) 計(jì)數(shù),分別接種在新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。

直接傳代法:讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清液吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成細(xì)胞懸液后再傳代。


3.  部分貼壁細(xì)胞的傳代

1)部分貼壁不牢的細(xì)胞,如Hela細(xì)胞等,不經(jīng)消化處理直接吹打可使細(xì)胞從壁上脫落下來,而進(jìn)行傳代。

2)對(duì)絕大部分貼壁生長的細(xì)胞,因直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,細(xì)胞常有較大數(shù)量的丟失,因而需消化后,才能吹打傳代。

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