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當(dāng)前位置:首頁(yè)技術(shù)文章雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

更新時(shí)間:2023-12-12點(diǎn)擊次數(shù):2976

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)


熒光素(Luciferase)是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱(chēng),其中螢火蟲(chóng)熒光素 F-Luciferase 和海腎熒光素 R-Luciferase 具有代表性。

研究者利用熒光素酶開(kāi)發(fā)出一套極其靈敏且使用方便 的基因報(bào)告系統(tǒng)。目前,雙熒光素酶通常是指螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區(qū)別:1. 物種來(lái)源不同;2. 它們的底物和輔因子不同;3. 發(fā)光的顏色不同。

螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白,甲蟲(chóng)(Photinus pyralis)中分離得到,大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下,催化底物螢火蟲(chóng)螢光素氧化,生成氧化螢光素,并發(fā)出黃綠色光,其*發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。

海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白,海腎(Renilla reniformis)中分離,大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素,氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide,并發(fā)出藍(lán)光,其*發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。

因此,正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同,所以在雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。


雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)優(yōu)勢(shì)

單報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)往往會(huì)受到各種實(shí)驗(yàn)條件的影響,而雙報(bào)告基因則通過(guò)共轉(zhuǎn)染的“對(duì)照"作為內(nèi)參為試驗(yàn)提供一基準(zhǔn)線(xiàn),從而可以避免細(xì)胞活性和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,使得數(shù)據(jù)結(jié)果更為可信。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)常用的載體有兩種策略。第一種是兩種熒光素分別位于兩個(gè)載體上,第二種是兩種熒光素酶位于同一個(gè)載體上。

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目前,這一系統(tǒng)被廣泛用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與啟動(dòng)子活性分析、RNA 降解、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、藥物篩選、動(dòng)物活體成像等領(lǐng)域。pGL3-Basic 質(zhì)粒用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)與啟動(dòng)子活性分析;psiCHECK2 質(zhì)粒用于 miRNA 與其靶點(diǎn)相關(guān)分析。

上海昆盟生物科技有限公司 (Coweldgen Scientific Co.,LTD) 是一家專(zhuān)注于生命科學(xué)領(lǐng)域提供相關(guān)試劑產(chǎn)品和服務(wù)的生物高科技企業(yè),坐落于上海聚科生物產(chǎn)業(yè)園。公司提供種類(lèi)齊全的細(xì)胞系和多種原代細(xì)胞、質(zhì)量穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)試劑產(chǎn)品、成熟高效的技術(shù)服務(wù)。本著“守正創(chuàng)新,科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)"的理念,我們以高標(biāo)準(zhǔn)塑造行業(yè)品牌,以全新視野構(gòu)建現(xiàn)代企業(yè),勇于探索和創(chuàng)新。公司業(yè)務(wù)范圍涉及全國(guó)各省市自治區(qū),與國(guó)內(nèi)多家醫(yī)院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作關(guān)系,贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的認(rèn)可,我們保證將繼續(xù)為廣大科研用戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)、高效、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品及服務(wù)!

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